副豬嗜血桿菌病又稱革拉澤氏病，是由副豬嗜血桿菌（Hps）引起的豬的上呼吸道傳染病，主要感染斷奶前后仔豬，臨床上表現(xiàn)為多發(fā)性纖維素性漿膜炎、關(guān)節(jié)炎和腦膜炎，對世界養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大經(jīng)濟(jì)損失。隨我國養(yǎng)豬業(yè)的快速發(fā)展，該病的流行愈發(fā)廣泛，及時(shí)、快速和準(zhǔn)確地診斷出該病以便及早地采取相應(yīng)的應(yīng)對措施，有助于該病的控制。

1.病原學(xué)檢測

病原學(xué)檢測是副豬嗜血桿菌病的經(jīng)典診斷方法，該方法是根據(jù)臨床癥狀、剖檢病變進(jìn)行細(xì)菌分離培養(yǎng)鑒定。副豬嗜血桿菌病的主要臨床癥狀表現(xiàn)為咳嗽、呼吸困難、消瘦、跛行。主要剖檢病變表現(xiàn)為纖維素性胸膜炎、心包炎、腹膜炎、多關(guān)節(jié)炎和腦膜炎，心包積水，腹膜積水等。Hps的培養(yǎng)條件苛刻，生長過程需要額外的NAD（煙酰胺腺嘌呤二核苷酸）和血清，其分離培養(yǎng)的常規(guī)操作是將臨床病料接種到血瓊脂平板或TSA固體培養(yǎng)基上（含NAD和血清）進(jìn)行純化培養(yǎng)鑒定。

2.血清學(xué)檢測

臨床上用于檢測副豬嗜血桿菌抗體的方法有補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)（CF）、間接血凝試驗(yàn)（IHA）和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。

補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)  使用CF進(jìn)行血清學(xué)檢測發(fā)現(xiàn)各種血清型之間具有廣泛的交叉反應(yīng)，而且操作復(fù)雜，影響因素繁多，現(xiàn)已被其他方法取代。

間接血凝試驗(yàn)  該方法操作方便，結(jié)果肉眼可見，但也存在一些缺點(diǎn)，如不同批次制備的抗原或抗體可使結(jié)果的敏感性和穩(wěn)定性不一致，以及容易受到外界雜質(zhì)污染而造成非特異性凝集。

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)  ELISA檢測方法敏感性高、穩(wěn)定性好、操作簡便、快速，可用于大批量的抗原或抗體樣品的檢測，臨床應(yīng)用優(yōu)于前兩者。其包被抗原的選擇必須是具有特異性的。建立Hps抗體間接ELISA方法所用的抗原通常為滅活的Hps全菌、Hps菌體超聲裂解上清和表達(dá)純化的Hps蛋白（如omp P2、P2和耐熱蛋白等）。

血清學(xué)檢測只能作為豬群是否感染過副豬嗜血桿菌的診斷依據(jù)，而不能作為診斷該病的依據(jù)，在臨床診斷中，除了觀察豬群臨床癥狀、病原分離鑒定等傳統(tǒng)方法，分子診斷技術(shù)也在不斷地發(fā)展。

3.分子生物學(xué)檢測

常規(guī)PCR  PCR方法是實(shí)驗(yàn)室常用的分子生物學(xué)診斷方法，因其檢測的靈敏度高、特異性強(qiáng)、快速、簡便等優(yōu)點(diǎn)，在副豬嗜血桿菌病的診斷上得到了十分廣泛的應(yīng)用。通常針對Hps的16S rRNA基因設(shè)計(jì)特異性PCR引物，建立副豬嗜血桿菌病的PCR檢測方法。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR  實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測是一種新的技術(shù)，它是將光譜技術(shù)和PCR 技術(shù)相結(jié)合的一種核酸定量檢測技術(shù)。與常規(guī)PCR 方法相比，實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測可以定量起始DNA 模板的拷貝數(shù)，反應(yīng)時(shí)間短，靈敏度比普通PCR 提高100倍，并能減少假陽性發(fā)生的幾率，特異性更高，檢測結(jié)果更為直觀。通常根據(jù)Hps的16S rRNA基因或轉(zhuǎn)錄起始因子infB 基因的保守序列，建立基于SYBR Green I 或TaqMan探針的檢測Hps的實(shí)時(shí)熒光定量PCR 技術(shù)。

環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)  環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（LAMP）最早是由日本學(xué)者Notomi 于2000年提出的新的基因診斷技術(shù)，目前已有一些病原微生物成功利用LAMP 檢測，該方法靈敏度高，反應(yīng)時(shí)間短，無需特殊儀器，操作簡單，特別適合基層人員操作。選擇Hps某個(gè)合適基因的保守區(qū)域設(shè)計(jì)LAMP特異性引物，可建立Hps的LAMP檢測方法。在實(shí)際操作中，由于該檢測方法靈敏度高，容易造成氣溶膠污染而出現(xiàn)假陽性的結(jié)果。

4.展望

副豬嗜血桿菌病快速、準(zhǔn)確的診斷方法不僅對于及時(shí)采取措施防控疫情蔓延至關(guān)重要，還有助于Hps流行菌株的監(jiān)測，對副豬嗜血桿菌病新型疫苗的開發(fā)具有重要指導(dǎo)的意義，從而更有利于副豬嗜血桿菌病的防控。隨著分子生物學(xué)的快速發(fā)展，一些新型的、應(yīng)用性更為廣泛的診斷方法將得到開發(fā)和推廣應(yīng)用，使人們能更快速、準(zhǔn)確地診斷副豬嗜血桿菌病。

來源：永順人生