36年堅(jiān)守與開拓，助力豬瘟疫苗1.0到3.0時(shí)代的飛躍

豬瘟被世界動物衛(wèi)生組織（OIE）列為A類16種法定傳染病之一，我國定為一類烈性傳染病。發(fā)病率、死亡率高，對豬場形成巨大威脅。本期《動物防疫一線》專訪廣東永順生物制藥股份有限公司豬瘟項(xiàng)目專家吳文福，請他為我們介紹我國豬瘟防控歷史、流行趨勢以及防控要點(diǎn)。

專家簡介：吳文福，永順生物豬瘟、偽狂犬疫苗項(xiàng)目專家、高級獸醫(yī)師。1982年進(jìn)入廣東省生物藥廠（永順生物前身），88年開始主持和主要參與了豬瘟疫苗的生產(chǎn)、研發(fā)和質(zhì)量管理工作。孜孜不倦36年，見證和促進(jìn)了豬瘟疫苗1.0到3.0時(shí)代的飛躍。

豬瘟流行趨勢

豬瘟歷史久遠(yuǎn)，1833年首先發(fā)現(xiàn)于美國的俄亥俄州，中國何時(shí)發(fā)現(xiàn)和證明豬瘟存在，雖沒有明確的文字記載，據(jù)1935年調(diào)查，我國大部分省都有發(fā)生，但防控研究做得比較早也取得了很好的效果。經(jīng)過老一輩獸醫(yī)工作者的努力，1954年中國首創(chuàng)了舉世聞名的豬瘟兔化弱毒疫苗（即C株），隨后豬瘟兔化弱毒苗的生產(chǎn)遍及全國各地，豬瘟得到了有效控制。

90年代以來，隨著我國養(yǎng)豬業(yè)的快速發(fā)展，豬病復(fù)雜化，免疫抑制病愈加嚴(yán)重，豬瘟出現(xiàn)局部散發(fā)流行，呈現(xiàn)非典型癥狀、慢性豬瘟及隱性感染等形式。一直到2000年后的一段時(shí)間，豬瘟流行及危害還是比較大的。

21世紀(jì)，豬瘟基本是呈散發(fā)及隱性感染，教科書式的典型病例，只能在理想的實(shí)驗(yàn)狀態(tài)下觀察到，例如高熱稽留，體溫升高到41℃以上，有眼屎，先便秘后拉稀，解剖可看脾臟出血性梗死，腎臟小點(diǎn)出血，回盲瓣紐扣狀潰瘍等。在豬場實(shí)際生產(chǎn)中很少見到如此典型的癥狀，臨床上可能僅表現(xiàn)發(fā)燒、不食，肉眼難以辨別，一般只能采血或病料做實(shí)驗(yàn)室檢測。豬瘟的這種流行狀態(tài)，與疫苗的廣泛應(yīng)用及豬場的管理水平的提高不無關(guān)系。

永順生物《豬瘟2017年度檢測報(bào)告》顯示，2017年永順生物對全國各地送檢的614個(gè)豬場共22536份豬血清進(jìn)行豬瘟抗體檢測，陽性率為86%；對來自全國各地的146個(gè)豬場共378份病料進(jìn)行抗原檢測，陽性率為6.1%。吳文福表示，國家豬瘟免疫防控方案要求整體抗體陽性率70%以上，所以作為總體結(jié)果的86%的抗體水平，說明疫苗的免疫效果比較好；抗原陽性率6.1%，說明豬瘟有散發(fā)的存在。

據(jù)獸醫(yī)公報(bào)數(shù)據(jù)，2004-2015年，豬瘟病原陽性率從17.8%下降到0.9%，可以看出，自2008年ST豬瘟苗面市以來，豬瘟病原陽性率呈下降趨勢。總體來說，現(xiàn)在豬瘟免疫比較好，是可控狀態(tài)，但還存在地方散發(fā)的情況，可能因?yàn)槊庖吒采w不到位或者有免疫抑制性疾病等干擾造成免疫失敗。

豬瘟疫苗的發(fā)展歷史

廣東永順生物制藥股份有限公司的前身廣東省生物藥廠，我國豬瘟疫苗的發(fā)展史其實(shí)也是永順生物的發(fā)展史。C株是全世界公認(rèn)的最安全有效的疫苗毒株，自1954年研發(fā)成功后，豬瘟疫苗經(jīng)歷了幾個(gè)階段：

1、組織苗：豬瘟疫苗一開始是滅活苗。1954年出現(xiàn)弱毒苗，1958年凍干技術(shù)問世后，可實(shí)現(xiàn)疫苗長時(shí)間保存，全國的疫苗廠都開始批量生產(chǎn)，廣東省生物藥廠的第一個(gè)產(chǎn)品正是豬瘟弱毒脾淋苗。隨著我國生豬產(chǎn)量增多，以及脾淋苗自身局限性——病毒含量和質(zhì)量難以有所突破，脾淋苗不能滿足生產(chǎn)需要，市場上開始出現(xiàn)乳兔組織苗，此苗含有肌肉，效價(jià)不高，且質(zhì)量不穩(wěn)定；后來也有牛的脾臟、淋巴結(jié)做成的組織苗，但都效價(jià)不高、不穩(wěn)定，存在外源病毒污染的風(fēng)險(xiǎn)，而且成本高，沒有推廣應(yīng)用；

2、原代細(xì)胞苗：原代細(xì)胞苗相對于組織苗有很大的進(jìn)步，可批量生產(chǎn)，質(zhì)量可控性好。有豬腎細(xì)胞、羊腎細(xì)胞、牛睪丸細(xì)胞等，廣東省生物藥廠的羊腎細(xì)胞苗還獲得了1988年廣東省科技進(jìn)步獎(jiǎng)。但豬腎原代細(xì)胞有攜帶豬瘟強(qiáng)毒的風(fēng)險(xiǎn)，且腎細(xì)胞制備及培養(yǎng)過程中容易污染。牛睪丸原代細(xì)胞污染率雖大大降低，材料也相對羊腎易得，但產(chǎn)量和質(zhì)量無法提高，批間差異大，質(zhì)量不穩(wěn)定，且有污染BVDV的風(fēng)險(xiǎn)；

3、傳代細(xì)胞苗：基于對疫苗質(zhì)量提升的不斷追求，永順生物與中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所2004年開始做豬瘟ST(豬睪丸)傳代細(xì)胞苗，其優(yōu)點(diǎn)是，生產(chǎn)用細(xì)胞是傳代細(xì)胞，建立細(xì)胞庫，可保存于-196℃的液氮罐，每一批次的細(xì)胞均嚴(yán)格進(jìn)行細(xì)菌、支原體、外源性病毒、致畸致瘤性檢驗(yàn)和胞核學(xué)檢查、產(chǎn)毒試驗(yàn)等，細(xì)胞檢驗(yàn)合格后才能用于疫苗生產(chǎn)，這樣就保證了疫苗質(zhì)量的純凈、穩(wěn)定均一。

對于疫苗，大家關(guān)注重點(diǎn)無非是產(chǎn)品安全、有效，品質(zhì)均一、穩(wěn)定，使用方便。傳代細(xì)胞苗質(zhì)量均一、穩(wěn)定，效價(jià)高，使用方便是毋庸置疑的，但無法消除當(dāng)時(shí)外界對傳代細(xì)胞安全性的質(zhì)疑。2004年開始，永順生物做了很多試驗(yàn)，對傳代細(xì)胞的安全性做了系統(tǒng)的研究：將傳代細(xì)胞大量注入到仔豬，一直觀察到出欄，將不同日齡的豬解剖、做病理切片，結(jié)果證明沒有致瘤致畸性；一年兩次大劑量注射母豬，觀察所產(chǎn)仔豬情況，觀察了幾年也未發(fā)現(xiàn)有致畸性。2007年豬瘟ST傳代細(xì)胞苗試制成功并申請了專利，2008年獲得臨時(shí)批文，2012年拿到新獸藥證書和生產(chǎn)批文，該生產(chǎn)技術(shù)并于2012年轉(zhuǎn)讓給全國18家生產(chǎn)企業(yè)。

這些疫苗的不同之處還在于：

安全性方面：上述3種疫苗基礎(chǔ)毒種都是中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所提供的豬瘟兔化弱毒，毒種經(jīng)過長期研究證明不會對豬引起任何不良反應(yīng)，這些疫苗最大的區(qū)別在于過敏性反應(yīng)，而引起過敏性反應(yīng)的主要是異源蛋白。組織苗，異源蛋白含量最大，過敏反應(yīng)也大；細(xì)胞苗，主要的異源蛋白來自細(xì)胞培養(yǎng)和病毒培養(yǎng)當(dāng)中的牛血清和保護(hù)劑里的牛奶等。原代細(xì)胞苗病毒含量較低，每頭份疫苗中血清量、保護(hù)劑量較大，所以副反應(yīng)較大；傳代苗病毒含量高，每頭份疫苗中血清量和保護(hù)劑量也小，可能引起的過敏反應(yīng)也小。

效力方面：按現(xiàn)在的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，脾淋苗的病毒含量是150個(gè)兔體感染量，牛睪丸原代細(xì)胞苗是750個(gè)兔體感染量，ST傳代細(xì)胞苗是7500個(gè)兔體感染量。企業(yè)的內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)一般都比國標(biāo)高，永順豬瘟ST傳代細(xì)胞苗的抗原含量是18000-20000個(gè)兔體感染量。

穩(wěn)定、均一性：脾淋苗因每批苗由成千上萬只兔的脾淋組織制成，批間差異大，質(zhì)量不穩(wěn)定；牛睪丸原代細(xì)胞苗每次制苗用細(xì)胞來源于不同的牛，批間差異大，質(zhì)量不穩(wěn)定；ST傳代細(xì)胞苗因建立了細(xì)胞庫，生產(chǎn)的疫苗批間差異小，永順生物在研究生產(chǎn)ST豬瘟傳代細(xì)胞苗十余年，產(chǎn)品質(zhì)量十分穩(wěn)定、均一，如效價(jià)一直穩(wěn)定在18000-20000個(gè)兔體感染量。

純凈性：ST豬瘟傳代細(xì)胞苗是最好的，因?yàn)槎痉N、細(xì)胞、血清等原材料都可以嚴(yán)格控制，血清均經(jīng)過滅活處理，確保純凈無污染（特別是BVDV）。其次，按照質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)來講，脾淋苗每頭份允許含有75個(gè)以內(nèi)非病原菌，而細(xì)胞苗要求應(yīng)無菌。

現(xiàn)在是豬瘟3.0時(shí)代

這三種疫苗在豬瘟防控上具有里程碑式的意義，吳文福認(rèn)為，工業(yè)時(shí)代有1.0、2.0、3.0的劃分，豬瘟疫苗其實(shí)也可以這樣劃分，組織苗、原代細(xì)胞苗、傳代細(xì)胞苗分別代表了豬瘟1.0、豬瘟2.0、豬瘟3.0時(shí)代。

永順生物在豬瘟苗上獨(dú)具優(yōu)勢，每年銷售超2億頭份，每年以20%以上的速度增長，市場認(rèn)可度非常高。除了ST傳代細(xì)胞苗，一直也在研發(fā)新產(chǎn)品，不斷更新?lián)Q代�，F(xiàn)在在做的豬瘟相關(guān)的苗有：

1、E2基因工程苗，此苗安全性高，可區(qū)分疫苗免疫和野毒感染，但免疫效果要達(dá)到ST苗效果比較難。免疫攻毒試驗(yàn)顯示，雖然免疫仔豬不會死亡，但部分仔豬會有體溫反應(yīng)；2、標(biāo)記性疫苗，在弱毒株里插入標(biāo)記蛋白基因以區(qū)分疫苗毒和野毒，此苗還在試驗(yàn)階段；3、生產(chǎn)工藝的更新改進(jìn)，例如采用耐熱保護(hù)劑，原來的疫苗只能-15℃保存，加入耐熱保護(hù)劑后可在2-8℃保存24個(gè)月，疫苗效價(jià)無明顯下降，目前正在申報(bào)當(dāng)中；4、免疫增強(qiáng)劑，已研發(fā)出有一定效果的產(chǎn)品；5、聯(lián)合疫苗，采用耐熱保護(hù)劑技術(shù)的豬瘟-藍(lán)耳二聯(lián)苗在新獸藥注冊階段，其它的聯(lián)苗還有豬瘟-偽狂、豬瘟-藍(lán)耳-偽狂三聯(lián)。

（未完待續(xù)）